出国体检人员中可疑氯胺酮阳性病例确证分析

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出国体检人员中可疑氯胺酮阳性病例确证分析

关键词:氯胺酮;毒品;确证;单四极杆气相色谱质谱联用法

可疑吸毒人员的毒品检测方法包括初筛和确证两步。当前在日常工作中普遍采用的毒品初筛方法为免疫胶体金法,此法灵敏、简便、快速,但会出现假阳性结果。毒品确证研究对毒品的认定、戒毒治疗过程的监测,以及打击毒品走私和开展禁毒戒毒工作十分重要,已成为当前法庭科学研究的热点。

毒品确证实验中色谱及其联用技术被认为是较为理想的分析检测手段。气相色谱质谱联用技术也成为毒品确证的金标准之一。氯胺酮在20世纪70年代初被作为麻醉药用于临床,近年来娱乐性使用氯胺酮的问题愈演愈烈,成为导致暴力犯罪、增加HIV感染机会的重要因素。在日常毒品初筛检测中,氯胺酮阳性情况时有发生,因此在初筛实验中对氯胺酮阳性的样本必须进行进一步的确证实验。

以文献上关于采用单四极杆气质联用仪分析临床样本中常见精神药品、麻醉药品的经典样品前处理和色谱分析条件为基础,进一步对样品前处理条件、色谱条件、质谱条件进行了优化。对初筛阳性的尿液样品、康泰克药片和空白尿样采用单四极杆气质联用仪分析检测,获得了相应的总离子流色谱图以及相应确认物质的质谱图,对氯胺酮初筛阳性样品进行了确证分析。

本文通过1例氯胺酮初筛为阳性的样本,对待检尿液样本采用气相色谱/质谱联用法(GC/MS)进行了确证实验并对得到的谱图数据进行了分析判断,最终给出确证实验结论单,为以后氯胺酮初筛为阳性样品的确证积累了经验。

1材料与方法

1.1检测样品初筛阳性的尿液样品(毒检尿样初筛中检测出1例氯胺酮阳性样本,随后对该尿样进行保留和分装)、康泰克感冒药片(市售康泰克感冒药片,并对药片研磨成粉进行保留)、空白尿样(未吸毒健康人员尿液)。

1.2 试剂及仪器 Agilent5973单四极杆气质联用仪(美国Agilent公司),Beckman低温冷冻离心机(德国Bechman公司),氮吹仪(北京普立泰科仪器有限公司),盐酸氯胺酮标准品,乙酸乙酯,碳酸钠均为分析纯。12.5 mg盐酸氯胺酮(国家麻醉药品实验室)溶于乙酸乙酯,定容至25 ml,配制成500 μg/ml盐酸氯胺酮的标准储备液,置-10℃冰箱中保存。将标准储备液用乙酸乙酯稀释得到2 μg/ml氯胺酮的标准工作液。

1.3 方法

1.3.1液一液萃取法

1.3.1.1 萃取条件的优化参考文献材料,以加标尿样作为萃取条件优化对象,对液一液萃取实验中采用的萃取剂、萃取温度、萃取时间、萃取剂用量、尿液pH值进行优化,给出获得准确萃取结果的最优萃取条件。

1.3.1.2 萃取过程空白样本为健康人体尿液,加标样品为正常尿液加2μg/ml盐酸氯胺酮。取空白尿样、加标尿样和待测尿样各2 ml,各加入1 mol/LNa2CO3溶液3—4滴,调pH值为12,加入2ml乙酸乙酯萃取2次,合并萃取液,将样品转移至离心管中,以10000 g离心10 min。取上清液,3℃下氮吹仪吹干,用200μl乙酸乙酯定容进样。康泰克药粉经研磨后加入乙酸乙酯进行萃取,振荡,离心后取上清液直接进样。

1.3.2 色谱及质谱条件色谱柱为DB-5MS毛细管柱(30 mx0.2 mmx0.33 μm),质谱库NIST98。载气(He,99.999%)流速1.2 ml/min,恒流模式,分流比20:1。柱温采用程序升温:10℃保持1 min,以20℃/min速度上升到30℃保持6min。进样口和气质接口温度分别为26℃和280℃,进样量1μl。质谱离子源El70Ev,离子源和四级杆温度分别为23℃和15℃,氯胺酮的选择离子检测的离子为m/z 209、182、180、152,溶剂延迟3.0 min。

2结果

2.1 萃取剂的选择实验对比了乙酸乙酯、环己烷、乙醚对空白尿样中氯胺酮的萃取效果。实验表明:乙酸乙酯萃取率较高,杂质干扰较少,故选用乙酸乙酯作为萃取剂。2.2萃取温度的优化取2 ml乙酸乙酯,分别在4℃、5℃、6℃、7℃下进行液液萃取,萃取方法见1.3.1.2;结果表明:5℃时萃取效率最高,因此选择5℃C作为萃取温度。

2.3 萃取时间的优化萃取方法按照1.3.1.2,萃取时间分别为6 min、8min、10 min、12 min。结果表明:8 min时的萃取效果最佳,故选萃取时间为8 min。

2.4 萃取剂用量的优化分别取萃取剂乙酸乙酯的用量为2 ml、4 ml、6 ml、8 ml,在50℃萃取温度下保持8 min,其余按1.3 .1.2方法处理样本。结果表明:萃取剂<4 ml="">4 ml以后,萃取率降低。故选择乙酸乙酯的用量为4 ml。

2.5 尿液pH值优化 按实验方法,用1 mol/L Na2CO,溶液分别调尿液pH至10~13.8之间,50℃萃取温度下萃取8 min,其余按1.3.1.2处理方法进行处理。结果表明:pH值为12时,萃取效果最佳。碱性过高,会影响尿液中H2PO4-、HPO42-组成比例,导致萃取率降低。故选尿液pH值为12时进行萃取。

2.6 4种毒品混标总离子色谱图 在最优萃取条件下获得的4种毒品混标总离子色谱图见图1。

首先给出在最优前处理条件以及色谱质谱条件下,4种常见毒品的总离子色谱图对以下实验结果进行参考对照。

2.7康泰克感冒药的检测谱图 经分析康泰克感冒药的总离子流色谱图(图2)显示有2个主要成分,其中6.13 min出的色谱峰的质谱图(图3),将其与质谱库中的谱图对照判定为麻黄素。由于对所建立方法的灵敏度要求比较高,所以采用GC/MS中的同步选择离子检测(SIM)方法,而没有采用全扫描(SCAN)方法。其中8.12 min出的色谱峰与谱库中标准谱图相比匹配度较低,未确定出是什么物质,但也不会对目标物氯胺酮的分析产生影响。


2.8待测尿样的检测谱图 图4所示为待测尿样的总离子流色谱图,其中保留时间为6.13 min处出现一色谱峰,该峰与同样条件下感冒药康泰克在相同保留时间时出现色谱峰相同,通过该峰的质谱图(图5)所示,可以确定待测尿液中确实同样存在麻黄素。

2.9空白加氯胺酮标样的检测谱图 图6为空白尿液加标样品的总离子流色谱图,图中可以看到9.25min为典型的氯胺酮色谱峰,从质谱图7中可以进一步证实为典型氯胺酮质谱图。该加标样本的检测结果证明在实际样品检测中对氯胺酮萃取的前处理过程可以准确获得目标物氯胺酮。


2.10 空白尿样的检测谱图 图8为空白尿样的总离子流色谱图,可以看到在8.98 min处有一个色谱峰,由于对所建立方法的灵敏度要求比较高,所以采用GC/MS中的SIM方法。由于8.98 min出的色谱峰与谱库中标准谱图相比匹配度较低,未确定出具体物质,但根据经验推测为不同人体个体中的未知代谢物,对目标物氯胺酮的检测并无干扰。

3讨论

在日常毒品初筛检测中,氯胺酮阳性情况时有发生,其原因之一为毒品初筛使用的胶体金免疫测试板中包被的氯胺酮抗体的特异性不够高;其二为氯胺酮分子结构与其他药物代谢物的结构较相似,容易被干扰。因此,进一步的确证实验和确证分析就尤为重要。

麻黄素亦称麻黄碱是从中药麻黄中分离的一种生物碱,是大部分感冒药中的主要成分之一。康泰克感冒药中的主要成分之一是麻黄素,在毒品初筛中发现其可使氯胺酮和甲基苯丙胺胶体金试纸条呈阳性结果。因此,如果待检人员服用药物,情况就比较复杂,以此样品为例的实验结果进行分析如下:

(1)在待检尿样的总离子色谱图中,用质谱定性确定同样存在康泰克感冒药中的麻黄素成分。

(2)在空白加氯胺酮标样的样品检测谱图中可以看到氯胺酮标样的色谱峰。该检测结果证明在实际样品检测中对氯胺酮萃取的前处理过程是正确无误的,可以准确获得目标物氯胺酮。

(3)以空白尿样检测谱图为对照,综合以上空白加标样品以及待检样品获得的谱图,发现空白样品谱图中未见氯胺酮和麻黄素的色谱峰这说明该GC/MS方法的选择性较好,检测过程是准确、可靠的。

从氯胺酮、麻黄素及甲基苯丙胺的分子结构方面分析这3种物质的结构式中均含有取代苯环、甲氨基的结构。由于在有机化学中酮与烯醇为互变异构体,在人体中代谢的主要途径是将物质羟基化或氨基化,因此,氯胺酮中的环己酮结构也可看做环己烯醇的结构,该结构与麻黄素中均含有羟基结构。综上认为3种物质结构确实较为相似,当待检样本中麻黄素的含量很大时,必然会引起毒品胶体金初筛实验阳性结果。

(4)检测结果为加标样品中检出氯胺酮,溶剂空白中未检出氯胺酮,空白尿样和待测尿样中未检出氯胺酮。最终结论为:该待测尿样中氯胺酮检测结果呈阴性。

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